Universalclimate.com

DNA elektrofores metod

Bakgrund

Gelelektrofores är en teknik som forskare använder för att undersöka DNA-fragment genom att separera dem utifrån de fragment storlekarna. DNA elektrofores metoder har program över flera vetenskapliga områden. DNA profilering används av kriminaltekniker i brottsutredningar. Det kan också användas för att kontrollera för genetisk villkor eller att fastställa faderskap. Biologer i fältet bevarande använder DNA elektrofores att fastställa hur nära organismer är relaterade, vilket är särskilt användbart vid uppfödning i fångenskap program där inavel problem är ett ständigt hot. Det är också anställd av evolutionsbiologer i deras undersökning av förhållandet mellan arter.

Gelen

Metoden DNA elektrofores börjar med hälla av agarosgel. Pulveriserad agaros, utdrag från tång som liknar gelatin, kombineras med en elektrofores buffert. En av de vanligaste typerna av buffert är Tris-Borat-EDTA (TBE). Blandningen skall genomgå värme tills det smälter, och sedan får svalna kort och placeras i en gjutning facket där det kommer att stelna. Blandningen är beredd på ett sådant sätt att fördjupningar, kallas provet brunnar, är kvar i gelen. Syftet med gel blandningen är att ge ett medium för DNA att resa genom som ger också motstånd.

Nuvarande

Gjutning facket placeras i en elektrofores kammare. DNA-prover, i en buffertlösning av sina egna, läses in i brunnarna. Vid denna tidpunkt, skickas ström genom gelen. Det är dock viktigt att se till att den negativa elektroden placeras på slutet när provet brunnarna befinner sig i kammaren. DNA är negativt laddade och kommer att färdas mot den positiva elektroden, som bör vara i bortre änden av facket. När strömmen är på, DNA fragment försöket att färdas mot den positiva elektroden. Gelen ger resistens mot DNA fragment och de mindre fragment kommer att färdas snabbare än de större.

Undersökning

Utvärdering av framstegen DNA kan ske på tre sätt. Spåra färgämnen kan användas, med bromofenolblått och xylen cyanol färgämnen som allmänt används för detta ändamål. En alternativ metod är att använda etidiumbromid, en fluorescerande färgning agent. Detta kan läggas att gelen före elektrofores processen. Men det kan också användas för att färga efter gelelektrofores genom nedsänkning i en utspädd lösning av etidiumbromid. Oavsett om etidiumbromid läggs förväg eller efter, undersöks i en ultraviolett transilluminator.